Analyse de cellules TCR-T

La prestation vise à déterminer si des cellules TCR-T exprimant le récepteur T 127E10 présentent un effet toxique sur des cellules humaines normales HLA-A2.01. Elle comprend une phase ferme de faisabilité, puis une phase d’analyse optionnelle, affermie après validation de la première phase.

Phase ferme — faisabilité de la co-culture

Le premier workpackage teste les conditions de co-culture des cellules TCR-T avec des cellules normales, ou dérivées d’iPSC, et définit le milieu adapté aux tests de toxicité. Les ratios de milieux de culture à examiner comprennent 100:0, 75:25 et 50:50. Le nombre de cellules et leur viabilité sont évalués avec un compteur de type NucleoCounter à au moins 0, 24 et 48 heures.

Les expériences sont réalisées en triplicats et représentent environ 100 à 200 points de mesure. Un rapport de faisabilité et une présentation de restitution des résultats sont remis, avec restitution en visioconférence.

Phase optionnelle — analyse des cellules

Le second workpackage évalue la toxicité des TCR-T 127E10 sur différents types cellulaires. Le CCTP indique un panel d’au moins cinq tissus humains, dont des cellules cardiaques et neuronales, et prévoit, pour cette phase, des cultures sur six tissus normaux. Les cellules différenciées visées comprennent notamment des neurones, cardiomyocytes, cellules intestinales, hépatocytes, cellules endothéliales et cellules mésenchymateuses, toutes de phénotype HLA-A2.01.

Les essais intègrent des contrôles positifs : doxorubicine ou staurosporine, ainsi qu’une lignée de sarcome d’Ewing HLA-A2:01 dont la sensibilité au TCR-T est connue. Ils évaluent aussi l’absence de toxicité envers des cellules d’un autre typage HLA et la toxicité éventuelle de cellules T non transduites par le TCR 127E10.

Pour les six tissus normaux, les cultures sont réalisées avec au moins deux, voire trois ratios TCR-T/cellules cibles (1:1, 0,25:1 et 0,5:1) et avec le peptide reconnu par le TCR, selon une gamme d’au moins cinq concentrations. À 24 heures, les mesures comprennent :

• l’impédance sur XCELLigence, exprimée en pourcentage de mort cellulaire ;
• l’activation des cellules T par FACS (CD3, CD8, CD69 et CD137) ;
• la sécrétion de cytokines IFNγ, IL-6, TNFα, IL-10 et IL-2.

Cette phase représente près de 30 000 points de mesure ; les expériences sont réalisées en triplicats. Les résultats sont compilés dans un rapport et une présentation de restitution en visioconférence.

Logistique et livrables

Les cellules TCR-T sont fournies par l’Institut Curie en cryovials congelés contenant du milieu de congélation, expédiés sur carboglace par transporteur. Le titulaire doit les conserver en azote liquide ou en vapeur d’azote. Les rapports sont remis en PDF et en version éditable Microsoft Word ; les présentations sont remises en PDF.