Microscope pour optoprotéomique guidée

Le marché porte sur un système de microscopie automatisé permettant la photobiotinylation de protéines par laser pulsé dans des régions d’intérêt définies automatiquement par analyse d’image. Il comprend le microscope, ses accessoires, la station informatique et le logiciel de pilotage, ainsi que l’installation, la mise en service, la formation et la garantie.

Le microscope inversé comporte un statif motorisé (trajets optiques, tourelle d’objectifs en position et en hauteur Z, changement des cubes de fluorescence), un condenseur et un maintien de focus fonctionnel avec les objectifs fournis, sur des supports pour fond de lamelle de verre de 0,17 mm. Les objectifs 10×, 20× et 40× présentent respectivement une ouverture numérique d’environ 0,45, 0,80 et 0,95 ; ils sont apochromatiques de l’UV au proche infrarouge et parfocaux.

Sont également prévus :

• une platine motorisée avec repositionnement XY et Z, zone de scan XY d’au moins 57 × 36 mm et inserts pour boîte de 35 mm, lame et boîte ibidi à 8 puits ;
• des filtres monobandes pour DAPI, GFP, Cy3 et Cy5, l’éclairage transmis LED ou halogène et l’éclairage LED réglable pour la fluorescence ;
• un laser pulsé femtoseconde autour de 780 nm, de puissance moyenne minimale de 800 mW et d’une fréquence de l’ordre de 80 MHz, réglable linéairement en intensité ; sa durée de vie doit être précisée ;
• des miroirs galvanométriques pour le balayage point par point des régions ciblées, avec les éléments de calibration ;
• une caméra sCMOS de champ minimal 2048 × 2048 pixels et de pixels de 6,5 µm au plus. Le fournisseur précise son rendement quantique sur le visible et garantit une réponse linéaire au signal.

Informatique et automatisation

Le système comprend une station informatique récente (âge maximal de six mois depuis sa production), configurée pour les volumes de fichiers supérieurs à 200 Go, avec écran haute résolution de 36 pouces. Windows 11 LTSC est souhaité au minimum ; les mises à jour de sécurité doivent être maintenues pendant l’exploitation, ou la mise à jour du système d’exploitation prise en charge par le fournisseur. En cas de panne, la prise en main à distance privilégie les outils de la plateforme. Aucune remontée automatique de données vers les services du fournisseur n’est admise et les disques durs restent la propriété de l’acheteur.

Le logiciel sous licence pilote les composants électroniques, acquiert des images multicolores en z-stack ou mosaïque, détecte en temps réel les régions d’intérêt par traitement d’image classique ou apprentissage profond, puis dirige le laser point par point. Le processus doit pouvoir être répété automatiquement sur des milliers de champs. Les mises à jour logicielles sont proposées gratuitement pendant la période de garantie. Les outils matériels ou logiciels de calibration et de diagnostic régulier, avec leurs manuels, sont fournis. L’équipement doit être conforme aux normes européennes et accompagné de son certificat de conformité.

Mise en service, vérifications et accompagnement

Le matériel est vendu départ usine ; le fournisseur précise le ou les lieux de mise à disposition. L’emballage est à sa charge. L’unité logistique désignée par l’acheteur assure l’acheminement et les démarches douanières. Le fournisseur installe et met en service le système en présence des ingénieurs du laboratoire, puis remet un compte rendu de vérification décrivant les essais et les valeurs mesurées.

Les contrôles portent notamment sur l’illumination LED (centrage supérieur à 50 % et uniformité supérieure à 40 % pour DAPI et GFP, tous objectifs, selon ISO 21073:2019), la fonction d’étalement du point de l’objectif 40× (FWHM inférieur à 1,5 fois la valeur théorique en 3D) et le co-alignement des canaux DAPI, GFP, Cy3 et Cy5 (ratio inférieur à 1,3 fois la FWHM théorique en xyz). La précision du photomarquage attendue est de 350 nm en XY et 1,5 µm en Z. Les essais vérifient aussi le maintien du focus, l’application automatisée des masques et la répétition du processus sans incident informatique, le bruit de lecture de la caméra (inférieur à 1,2 fois la valeur de sa fiche technique) et la fluidité du logiciel. Toute correction de pixels chauds ou froids doit être signalée. Le laboratoire réalise aussi une vérification de la corrélation entre les régions activées et celles révélées après marquage anti-biotine et nouvelle acquisition d’images.

Une formation de base en présentiel est assurée aux trois ingénieurs du plateau ; un ingénieur d’application peut être sollicité pendant la garantie pour optimiser les conditions d’utilisation. La garantie inclut les pièces, ordinateur et lasers compris, la main-d’œuvre, les déplacements et une visite préventive annuelle. L’offre précise les engagements de service après-vente : accès à un technicien, diagnostic à distance, intervention sur site, livraison des pièces, réparation, traitement des dysfonctionnements chroniques, durée de maintien en état, effectifs et localisation des ingénieurs compétents ainsi que lieux de stockage des pièces.