Maturation d'affinité d'un anticorps ScFv

Travaux à réaliser

• Conception de banques de variants : définition des zones ciblées (CDR ou positions définies), conception de schémas de mutagenèse dirigée et/ou aléatoire, synthèse ou construction des banques.
• Sélection et criblage : mise en œuvre de techniques de sélection adaptées (par ex. affichage phage et/ou levure, tri par liaison), stratégie de criblage itératif pour l'enrichissement de variants à haute affinité.
• Caractérisation biophysique et fonctionnelle : expression et purification des ScFv sélectionnés, détermination des constantes d'affinité et des paramètres cinétiques (kon/koff) par méthodes appropriées (ex. SPR ou BLI), évaluation de la spécificité et du profil de liaison.
• Évaluation de la stabilité et agrémentabilité : tests de stabilité thermique et d'agrégation, évaluation de l'expression et de la solubilité des variants optimisés.
• Analyses moléculaires : séquençage des variants clés, analyse des mutations, cartographie des mutations critiques pour l'affinité.

Livrables attendus

• Séquences des variants optimisés sous format exploitable.
• Matrices provenance/description des clones retenus.
• Données expérimentales complètes (données brutes et analyses) incluant constantes d'affinité et paramètres cinétiques.
• Protocoles opératoires standardisés pour expression, purification et assays de caractérisation.
• Rapport méthodologique détaillant les technologies utilisées, les procédures expérimentales, les critères de sélection et les recommandations d'utilisation et de distribution des livrables.

Exigences techniques et justificatifs

• Présentation de la méthodologie proposée et des plateformes/technologies mises en œuvre.
• Preuve d'expertise technique (certificat ou références expérimentales) montrant la capacité à réaliser les étapes listées.

Modalités particulières

• Variantes conceptuelles non autorisées ; options techniques éventuelles autorisées selon proposition.
• Remise de livrables sous formats numériques et protocoles rédigés pour exploitation ultérieure.