Extraction d'ADN à partir de tiques collectées
Extraction et traitement d'ADN
Objectif
Extraire de l'ADN à partir de tiques (tiques libres ou en cours de gorgement) et, le cas échéant, à partir d'échantillons de sang d'hôtes, en vue d'analyses PCR ciblées et d'identification d'espèces.
Réception et stockage des échantillons
- Réception des tubes Eppendorf contenant des tiques ou du sang conservés dans l'alcool.
- Registre des échantillons sous forme de tableur avec identifiants uniques.
- Stockage à -20 °C; possibilité de stockage à 4 °C avant extraction selon instructions.
Pré-traitement des tiques
- Élimination de l'éthanol.
- Lavage dans deux bains successifs de 5 minutes avec eau milliQ.
- Séchage sur papier absorbant.
- Transfert dans tubes de lyse (NucleoSpin Bead Tube Type D ou Lysing Matrix S selon protocole).
- Inclusion systématique d'un témoin négatif d'extraction par série.
Extraction d'ADN
- Mise en œuvre de kits commerciaux selon protocoles fabricants.
- Kits acceptés : NucleoSpin DNA Insect (méthode dédiée) et NucleoSpin Tissue (méthode dédiée).
- Pour l'extraction à partir de sang, utilisation exclusive du kit NucleoSpin Tissue et de la méthode associée.
Contrôle qualité et quantification
- Contrôle qualité inclus pour chaque série d'extraction (à décrire dans l'offre).
- Quantification des ADN extraits pour vérification du rendement et homogénéisation des concentrations pour analyses ultérieures.
Stockage, transfert et format des livrables
- ADN extraits identifiés et stockés à -20 °C jusqu'envoi en colis froid vers le laboratoire partenaire.
- Transmission d'un fichier de résultats exploitable (tableur ou équivalent) accompagnant chaque envoi.
Livrables et traçabilité
- Rapports intermédiaires annuels décrivant méthodologie, résultats et fichiers de contrôle qualité (format exploitable).
- Rapport final de synthèse quantitative et critique en PDF.
- Documentation complète de traçabilité (identifiants d'échantillon, paramètres opératoires, témoins, courbes/mesures sur demande).
Conformité
- Respect strict des protocoles fournis par les fabricants des kits sélectionnés.
- Intégration des contrôles de qualité et conservation des archives et fichiers de traçabilité.
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Critères d'évaluation
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